造紙工業(yè)是環(huán)境污染大戶，生產(chǎn)過程中化學(xué)制漿、洗漿、漂白以及抄紙工序會產(chǎn)生大量的廢水。化學(xué)制漿產(chǎn)生的黑（紅）液廢水與抄紙白水，可通過常規(guī)的堿回收工藝以及氣浮、過濾等處理后直接回用于生產(chǎn)。洗漿、漂白段產(chǎn)生的中段廢水污染物成份復(fù)雜，除含有高濃度的較難生物降解的木質(zhì)素、纖維素外，還含有對環(huán)境危害極大的低分子量氯代酚和色度很高的高分子量氯代木素衍生物、糖類、殘堿、無機鹽、揮發(fā)酸等，這段廢水COD高、pH變化幅度大、色度高、可生化性差，處理難度大，是真正意義上的造紙廢水。當前，采用常規(guī)的一級沉降與二級生化處理后，造紙廢水的污染負荷大幅降低，也達到了外排標準，但水的色度與COD值仍然較高，水中仍含有一定量毒性很高的可溶性木素衍生物與多酚類物質(zhì)，不僅達不到回用標準，外排還會對生態(tài)環(huán)境造成極大危害，研究造紙廢水的深度處理就顯得非常必要。

漆酶是一種含銅的多酚氧化酶，參與木素的降解或聚合，具有氧化木素的能力。在有氧條件下，漆酶能使造紙廢水中的木素衍生物和多酚類化合物發(fā)生氧化降解或聚合，進而通過絮凝沉淀或深度氧化除去，基于此，近年來用漆酶及產(chǎn)漆酶白腐菌深度處理造紙廢水成為研究熱點并取得了良好的效果。裂褶菌是一種珍貴的食、藥兩用真菌，研究證明，裂褶菌能分泌高活性的漆酶，裂褶菌漆酶在對紡織品染料進行脫色以及廢新聞紙的脫墨方面表現(xiàn)出良好的應(yīng)用效果，但有關(guān)裂褶菌漆酶應(yīng)用于造紙廢水處理方面的文獻并未見報道。

本文在前期篩選到一株產(chǎn)漆酶裂褶菌mys005并通過液體發(fā)酵培養(yǎng)得到了高活力漆酶的基礎(chǔ)上，主要開展裂褶菌mys005漆酶的酶學(xué)特性及深度處理造紙廢水佳工藝條件研究，以期為其工業(yè)化應(yīng)用積累數(shù)據(jù)并為應(yīng)用企業(yè)提供參考。

1、材料與方法

1.1 產(chǎn)漆酶菌種

采自秦嶺驪山，在愈創(chuàng)木酚-PDA培養(yǎng)基平板上產(chǎn)生深棕紅色變色圈，在α-萘酚PDA培養(yǎng)基平板上不產(chǎn)生變色圈；真菌ITS分子鑒定為裂褶菌（Schizo?phyllumcommuneFr.）,所內(nèi)編號mys005。

造紙廢水取自陜西某廢紙制漿造紙廠綜合廢水經(jīng)生化處理后的二沉池出水（廢水水質(zhì)：木素121mg/L，色度（倍）238，COD304mg/L，pH6.7）。

1.2 藥品、儀器與設(shè)備

實驗所用到的藥品均為分析純（天津百世化工）與生化級試劑（北京奧博星）；ABTS（2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽）為Sigma試劑；HBT（1-羥基苯并三唑）購自國藥集團試劑公司；BeckmanDU640紫外分光光度計；慍溫搖床：KYC-1102上海新苗醫(yī)療器械有限公司；慍溫培養(yǎng)箱：PYS-DHS上海躍進醫(yī)療器械廠；恒溫水浴箱：HH?W21?600S上海躍進醫(yī)療器械廠。

1.3 方法

1.3.1 漆酶液的制備

mys005斜面菌種用PDA平板活化2~3d后無菌操作打成￠6mm菌餅，接入搖瓶（500mL錐形瓶裝培養(yǎng)液150mL，接菌餅5片/瓶），于30℃搖床200r/min培養(yǎng)9d，發(fā)酵液先用脫脂棉過濾再于10000r/min離心10min得漆酶液。搖瓶培養(yǎng)基（20%馬鈴薯濾汁1000mL、K2HPO4?3H2O1.00g、NaCl0.50g、MgSO4?7H2O0.50g、NaNO32.50g、CaCl2?2H2O0.10g、FeCl30.02g、吐溫-801.20mL，微量元素復(fù)合液（50mg/mLCuCl2?2H2O+20mg/mLMnSO4?7H2O+10mg/mLZnSO4?7H2O）3mL、洋蔥100g（切碎）、麥麩10g），pH4.5，121℃滅菌20min。

1.3.2 漆酶活測定方法：ABTS法

酶活定義：以每min轉(zhuǎn)化1μmol/LABTS的酶量為一個酶活單位（U）。

1.3.3 漆酶酶學(xué)特性研究

1.3.3.1 漆酶適反應(yīng)溫度

用1.3.2節(jié)方法，選擇在不同溫度下測定酶活，活力高者為。

1.3.3.2 漆酶適反應(yīng)pH

用1.3.2節(jié)方法，選擇用不同pH的醋酸—醋酸鈉緩沖液測定酶活，活力高者為。

1.3.3.3 漆酶的熱穩(wěn)定性

取酶液在不同溫度下分別保溫不間，迅速冷卻到室溫，用1.3.2節(jié)方法測定酶活，以30℃測定的未保溫處理酶樣的酶活為。

1.3.4 漆酶處理造紙廢水研究

1.3.4.1 廢水處理方法

取200mL廢水樣于500mL錐形瓶中，調(diào)節(jié)pH，加入適量的漆酶液及介體HBT與水樣混勻，置于恒溫水浴進行處理，期間不間斷搖勻水樣，處理完成后將水樣用6層紗布過濾，收集上清液用于測定木素含量、COD及色度，計算降解率。

1.3.4.2 廢水木素含量的測定

由于木素的紫外吸收光譜在280nm處有特征吸收峰，可以在波長280nm下定量地測定水樣中木素的含量（濃度）。計算公式如下：

式中：A為吸光度；a為吸收系數(shù)，此水樣吸收系數(shù)采用26.1L/（g?cm）；b為比色皿的厚度1cm；c為測定水樣中木素吸收濃度，g/L。

木素降解率（%）=×100

1.3.4.3 廢水COD和色度的測定

COD的測定采用zhonggesuanjia法（GB/T11914-1989）。色度測定采用稀釋倍數(shù)法（GB/T11903-1989）。

COD降解率（%）=×100

色度降解率（%）=×100

2、結(jié)果與分析

2.1 裂褶菌mys005漆酶酶學(xué)特性

由于不同菌種來源的漆酶具有其不同的適反應(yīng)溫度、適pH、酶的熱穩(wěn)定性等酶學(xué)特性，應(yīng)用時要使酶發(fā)揮佳催化效率，取得佳處理效果，就有必要先對其酶學(xué)特性進行研究。