人抗凝血酶(AT) ELISA試劑盒操作流程如下：

1.【平衡試劑盒至常溫】：取出實驗過程中所需板條，剩余半條用自封袋密封放回4攝氏度。

2.【加樣】：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL。在樣本孔先加樣本10μl再加樣本稀釋液40μl，（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
3.【加酶】：標準品孔和樣本孔總每孔加入酶標試劑100μl（辣根過氧化物酶標記的檢測抗體）空白孔除外。
4.【溫育】：用封板膜封住反應孔，37℃恒溫箱溫育60分鐘。
5.【配液】：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
6.【洗滌】：小心揭掉封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置60秒后甩去洗滌液，吸水紙上拍干。如此重復5次（也可用洗板機洗板）。

7.【顯色】：每孔先加入底物溶液A 50μl，再加入底物溶液B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光孵育15分鐘。
8. 【終止】：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
9. 【測定】：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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ELISA操作技術影響：1）加樣后及時放入孵箱，標本較多時要分批操作。按照說明步驟嚴格控制操作時間，防止孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍難以清洗。2）顯色劑盡量再臨用前配制，堅持不用過期的顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用。3）加酶試劑后用吸水紙再酶標板表面輕拭吸干。4）合理安排檢測量以免反應板過多造成洗板等待時間長。5）嚴格按照試劑盒說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60min.