病毒是一種個體微小,結構簡單,只含一種核酸(DNA或RNA),必須在活細胞內寄生并以復制方式增殖的非細胞型生物.病毒滅活試驗是利用某種有代表性的活病毒及其細胞感染技術,評價各種消毒因子的病毒殺滅效果,驗證消毒因子的病毒滅活能力.

病毒滅活檢測病毒是一種個體微小，結構簡單，只含一種核酸（DNA或RNA），必須在活細胞內寄生并以復制方式增殖的非細胞型生物。

病毒是一種非細胞生命形態，它由一個核酸長鏈和蛋白質外殼構成，病毒沒有自己的代謝機構，沒有酶系統。病毒離開了宿主細胞，就成了沒有任何生命活動、也不能獨立自我繁殖的化學物質。它的復制、轉錄、和轉譯的能力都是在宿主細胞中進行，當它進入宿主細胞后，它就可以利用細胞中的物質和能量完成生命活動，按照它自己的核酸所包含的遺傳信息產生和它一樣的新一代病毒。

病毒滅活檢測病毒是一種可以在其它生物體間傳播并感染生物體的微小生物（其實因為病毒本身不能進行新陳代謝，某種程度上還不能說病毒是生物）。有時使用“病毒”描述那些在真核生物中傳播和感染的生物；使用“噬菌體”或“吞噬體”來描述那些在原核生物間傳播的生物。

滅菌：是指用物理或化學的方法殺滅全部微生物，包括致病和非致病微生物以及芽孢，使之達到無菌保障水平。經過滅菌處理后，未被污染的物品，稱無菌物品。經過滅菌處理后，未被污染的區域，稱為無菌區域。

消毒：消毒是指殺死病原微生物、但不一定能殺死細菌芽孢的方法。通常用化學的方法來達到消毒的作用。用于消毒的化學藥物叫做消毒劑。

通過上面的兩個概念你可以知道無論是細菌還是病毒在滅菌操作下都會被殺死，滅菌操作下除部分細菌的芽孢基本微生物都可以殺滅，也根據消毒液使用的不同或者微生物的耐受不同而效果不同。

病毒滅活試驗是利用某種有代表性的活病毒及其細胞感染技術，評價各種消毒因子的病毒殺滅效果，驗證消毒因子的病毒滅活能力。

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病毒殺滅效果試驗，主要適用于消毒產品鑒定或日常監測。用具有一定代表性的、活的病毒及其細胞感染技術，評價各種用途的消毒因子對測試病毒的殺滅效果。按此方法進行的試驗，只是對消毒因子的滅活病毒能力的重要方面進行驗證。

具體的病毒殺滅試驗檢測，不同的檢測單位機構，收費標準不同。不同的病毒殺滅驗證，收費要求也會不同。本公司通過實驗室資質認定，具備CMA及CNAS資質認證，能夠嚴格按照病毒滅活驗證標準方法，進行試驗檢測，出具可靠的CMA報告。

病毒失去感染性，稱為滅活。了解滅活的條件不僅對從患者分離病毒、防腐和消毒是必要的，和疫苗生產也有關系。病毒滅活的機理有三。

一、破壞包膜：包膜含有脂類物質，因之有包膜的病毒可迅速被脂溶劑破壞，如**或去氧膽酸鈉可使病毒滅活。實際上可利用病毒對脂溶劑的敏感性來檢查病毒是否有包膜。物理因子，如滲透壓改變、凍融、熱和干燥等都可引起包膜破壞。一般認為，呼吸道感染的病毒對于燥抵抗力弱，傳播主要是人間直接感染，這是因為有包膜的原故。

二、病毒蛋白質變性：能使蛋白質變性的化學制劑都能使病毒滅活，加熱引起變性也是有效滅活的方法。一般說病毒對熱抵抗力弱，60℃幾分鐘就使之感染性明顯降低，在分離病毒時，從患者取來的標本需低溫保存，迅速送往實驗室，長期保存要置于-80℃以下的低溫條件。

三、病毒核酸的損害：X線、γ線等電離輻射可切斷核酸，紫外線可使核苷酸鏈上相鄰的嘧啶堿基形成二聚物，而破壞病毒基因的功能。吖啶橙或中性紅等染料可與病毒核酸結合，暴露于光線之下，可使核酸分解，而使病毒滅活。

近年來，隨著單抗市場在國內的興起，對病毒清除技術（滅活和去除）的驗證也提出了更高的要求，從*初的低pH孵育到*近幾年除病毒膜過濾技術在病毒清除方面的成熟的應用，包括層析技術也逐漸被大家重視，從而提高下游工藝對于病毒的總的對數清除率。

在驗證實驗中，不管是哪種病毒清除技術，都是通過人為挑戰病毒，采用感染力或者其他適合的分析方法來估測樣品中的病毒滴度，測量出該步驟的病毒對數清除率，選擇一種合適的病毒滅活檢測分析方法對于病毒對數清除率的計算非常重要。

在病毒清除驗證中，病毒的檢測分為三種情況：

1、根據病毒的感染性來定量病毒的滴度，有兩種方法，一稱為病毒空斑形成實驗。二稱作TCID50半數細胞培養物感染量實驗，這種檢測方法是以細胞培養物中產生細胞病變效應（Cyto-pathic Effect，CPE）為基礎的檢測手段。

2、定量PCR的方法，空斑形成和TCID50這兩種以細胞為基礎的感染性分析被視為病毒清除研究中的估測病毒滴度的金標準，qPCR方法已經被迅速接受為病毒清除研究中估測病毒粒子的替代和補充方法。

3、直接用電子顯微鏡來計數病毒數目，由于該方法不能區分感染性病毒顆粒與非感染性病毒顆粒，無法判斷病毒的感染力，主要用于細胞發酵液的病毒初始量的計算中，著重介紹空斑形成實驗，TCID50實驗和qPCR三種檢測方法。

一、病毒培育與滅活實驗

1. 實驗材料

實驗用病毒株，宿主細胞，細胞培養瓶與 96 孔培養板，恒溫水 浴箱，二氧化碳培養箱，層流超凈工作臺，-80℃低溫箱，二氧化碳培養箱，液氮，離心設備，移液器，細胞維持培養基，細胞完全培養基，去離子水等。

2.實驗過程

病毒懸液制備：實驗組，陽性對照組，陰性對照組。病毒培育需每日觀察細胞與宿主細胞生長情況，接種細胞，病變收獲病毒， 每組按照特定條件設置病毒滅殺實驗驗證，并每組進行噬斑病毒感染滴度測定。平均滅活對數值計算，評價。

病毒滅活檢測的試驗階段：-飛凡標準技術服務(蘇州)有限公司

空氣消毒試驗分為實驗室試驗、模擬現場試驗與現場試驗，各自特點如下：

(1)實驗室試驗：以測定低有效劑量為目的，采用≥1m試驗柜、液體撞擊式采樣器、白色葡萄球菌，試驗菌霧粒